Внутрішньолабораторна апробація праймерів для молекулярно-генетичної ідентифікації грибів роду Fusarium link

В. Іщенко, Н. Волощук, О. Стерлікова, Людмила Гуменюк, В. Скляр, Л. Калакайло, Я. Іщенко, Л. Іщенко
Анотація

Наведено результати внутрішньолабораторної апробації методики молекулярно-генетичної ідентифікації грибів роду Fusarium методом ПЛР. Дослідження проводились методом полімеразної ланцюгової реакції з детекцією продуктів ампліфікації в агарозному гелі. Для визначення специфічності методики використовували різні штами грибів роду Fusarium, Alternaria Nees, Aspergillus P. Micheli ex Haller, Cladosporium Link, Drechslera S. Ito, Mucor Fresen., Rhizopus Ehrenb., Trichoderma Pers. Екстракцію ДНК проводили гуанідін-тіоціонатним методом із сорбцією на кремнію оксиді описаним R. Boom із співавторами. Для досліджень використовували праймери, які фланкують ділянку ITS регіону рибосомальної ДНК Fusarium spp розміром 431 н.п. Після ампліфікації в термоциклері 2720 (Applied Biosystems) із відповідним температурним режимом її продукти аналізували шляхом розділення в 1,5 % агарозному гелі. нтифікувалися як позитивні за допомогою запропонованих праймерів. Перехресних реакцій із мікроміцетами інших видів не відмічали. Чутливість ПЛР-аналізу на основі запропонованих праймерів становить 0,12 нг/мкл. Результати виявлення грибів роду Fusarium безпосередньо із зерна кукурудзи та продуктів його переробки свідчать, що більшість посівів кукурудзи на полях уражена мікроміцетами даного роду. Результати внутрішньолабораторної оцінки праймерів для ідентифікації Fusarium spp з дослідженням таких параметрів як специфічність та чутливість свідчать, що апробована методика дає можливість досить швидко і надійно проводити виявлення грибів роду Fusarium у зерновій продукції, а також може бути використана для підтвердження сумнівних результатів мікологічного аналізу

Ключові слова

молекулярні-генетичні методи досліджень, полімеразна ланцюгова реакція, фузарії

ЦИТУВАТИ
Ischenko, V., Voloshchuk, N., Sterlicova, O., Humeniuk, L. , Sklyar, V., Kalakailo, L., Ishchenko, Ya., & Ischenko, L. (2019). Interlaboratory aprobation of primers for molecular genetic identification of Fusarium link fungus. Scientific Reports of the National University of Life and Environmental Sciences of Ukraine, 15(6). https://doi.org/10.31548/dopovidi2019.06.017
Використані джерела
Використані джерела в процесі публікації